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聚己内酯/胶原蛋白止血修复膜的制备方法

实验指南    2021-09-18 14:29

一、背景

天然高分子止血材料的研制逐渐成为热点,本文利用天然高分子,如纤维素、胶原蛋白等为原材料制备出一系列具有良好止血效果的复合型止血材料。其中,氧化再生纤维素膜材料具有新颖的物理形态,对该材料的止血机制研究具有重要意义;胶原蛋白/氧化再生纤维素复合止血海绵具有优异的止血效果,同时具有良好的抑菌性能;而聚己内酯/胶原蛋白止血修复膜的制备则开启了止血材料的新思路,使得快速止血、长效抑菌、组织修复等多重功能有机的结合在一起。

二、实验步骤

1  含生长因子胶原蛋白/聚己内酯溶液的配置

由于自制二次纯化 I 型胶原蛋白(以下简称胶原蛋白,ColI)可纺性差,因此加入聚己内酯(Polycaprolactone, PCL)进行混纺。将聚己内酯与自提的胶原蛋白分别按照 10%的质量比,溶解于六氟异丙醇中,并利用磁力搅拌装置连续搅拌 6 h,直至得到均一透明的高分子溶液。将转化生长因子 TGFβ1 分别按照高浓度(10-3%w/w)与低浓度(10-4%w/w)均匀添加到不同溶液中:纯 ColI纺丝液,PCL-ColI A 纺丝液  (33.3%/66.7%, w/w), PCL-ColI B  纺丝液(40%/60%, w/w), PCL-ColI C 纺丝液  (50%/50%, w/w) and PCL-ColI D  纺丝液(66.7%/33.3%, w/w),纯 PCL 纺丝液。

2  T4 噬菌体胶原蛋白/聚己内酯溶液的配置

 

将聚己内酯与自提的胶原蛋白分别按照 10%的质量比,溶解于六氟异丙醇中,并利用磁力搅拌装置连续搅拌 6h,直至得到均一透明的高分子溶液。将培养好的 T4 噬菌体集中液迅速均匀的添加到不同溶液(1/100, v/v)中:纯 ColI 丝液,PCL-ColI A 纺丝液  (33.3%/66.7%w/w)PCL-ColI B  纺丝液(40%/60%w/w)PCL-ColI C 纺丝液  (50%/50%w/w)和 PCL-ColI D  纺丝液(66.7%/33.3%w/w),纯 PCL 纺丝液。

3  静电纺丝参数的设定

采用静电纺丝技术可以迅速获得质地均匀的纳米纤维膜。具体工艺参数如下:电压,20  kV;进料速率,1  mL/h;沉积时间,3 h;纺丝距离,10 cm;相对湿度,20-35%;室温。所有的纤维经纺丝后置于冷冻干燥机中 24 h,完全干燥后存储于-20℃。